Hlavní nabídka
KRÁJENÍ ŘEZŮ
Krájení řezů na mikrotomovém noži
Tkáň zalitou čistým parafínem vyklepneme z nádobky a pomocí skalpelu ořežeme do požadované velikosti. Bloček poté připevníme na dřevěnou krychličku (viz. kapitola 3.5. Krájení), která nám umožní uchycení preparátu pomocí svorek k mikrotomu.
Jednotlivé řezy lepíme na podložní sklo natřené gylcerolbílkem nebo želatinou. Gylcelorbílek připravíme smícháním vaječného bílku a stejného množství glycerolu. Připravené lepidlo natřeme prstem na předem odmaštěné podložní sklo.
Stejně jako při zalévání objektů do parafínu může i při řezání na mikrotomu docházet k chybám. Tyto chyby však mají většinou původ v některém z předchozích kroků, avšak rozpoznány byly teprve nyní.
Habrová (1986) uvádí devět základních chyb, se kterými se můžeme setkat:
1) Řezy se na noži svinují v úzké ruličky – tento případ může nastat ze dvou důvodů, buďto byl použit příliš tvrdý parafín nebo krájíme řezy o velké síle. Nastalou situaci můžeme vyřešit nahřátím mikrotomového nože na vyšší než pokojovou teplotu nebo snížením síly řezů.
2) Řezy se lepí na mikrotomový nůž – tento případ nastává, pokud byl k zalití použit příliš měkký parafín nebo je v laboratoři příliš vysoká teplota okolního vzduchu. Tuto situaci můžeme vyřešit zalitím tkáňových bločků do tvrdšího parafínu nebo přenesením mikrotomu do místnosti s nižší teplotou.
3) Řezy se mažou – tato situace nastává v případě, že bylo rozpouštědlo parafínu (benzen) špatně odstraněno z tkáně. V takovém případě je třeba tkáň znovu zalít.
4) Řezy se drobí – k tomuto případu dochází, pokud byla použita příliš studená vodní lázeň na zatvrdnutí parafínových bločků nebo byl použit nekvalitní parafín. Tkáň je proto nutné znovu zalít.
5) Řezy ulpívají na parafínovém bločku při zpětném tahu nože – k tomuto případu dochází, pokud je mikrotomový nůž špatně nabroušen nebo na něm ulpěly nečistoty.
6) Příčné bílé čáry a rýhy na řezech a řezné ploše – tato situace nastává, pokud se na noži vyskytuje nějaká nesrovnalost. Nůž je proto třeba dát znovu přebrousit nebo najít místo bez kazu.
7) Řezy netvoří souvislou pásku – k tomuto problému dochází, pokud bloček nebyl správně seříznut, byl použit příliš tvrdý parafín nebo vytváříme příliš silné řezy.
8) Objekt z řezu vypadává
9) Řezy jsou nestejně silné – tento problém je způsoben příliš malým sklonem mikrotomového nože nebo silnou vrstvou oleje na sáňkách mikrotomu (Habrová, 1986).